Kan Grupları Hakkında

Jel Santrifügasyon Yöntemi
Jel testi birçok yönden tüp yöntemine benzer Testte 5×7 cm büyüklüğünde plastik kartlar kullanılır Her kartın üzerinde 6 mikrotüp vardır Mikrotüplerin tabanı değerlendirmeyi kolaylaştırmak için konik; üst kısmı ise inkübasyon gerektiren testler için daha geniş olarak yapılmıştır Tüplerin içerisinde Sephadex-G 100 maddesini içeren bir jel vardır Bu madde başlangıçta toz halindedir; ancak buffer ile karıştığında jel halini alır Kartlar için jel hazırlanırken önce buffer ile yıkanarak şişmesi sağlanır Daha sonra da buffer içerisinde süspansiyonu hazırlanır Kullanılacağı testin özelliğine göre serum fizyolojik veya LISS buffer olarak kullanılır

Testte zaman ve hız yönünden standardize edilmiş bir santrifüj kullanılmaktadır Santrifügasyon işlemi 70x’de 10 dakika yapılır Deneysel çalışmalar santrifüj ekseninin de önemli olduğunu göstermiştir Bu nedenle eksen santrifüj gücü ile düşey ve yatay planda tam bir doğru oluşturmaktadır

Buffer ile yıkama sırasında şişen jel sadece aglutine olmayan RBC’lerin geçişine izin verir Aglutine olmayan eritrositler santrifüj işlemi sırasında jel tabakasını geçerek konik kısımda çökerler Aglutine olmuş eritrositler ise üst kısımda kümeler oluştururlar Kuvvetli aglutinasyonda çok büyük kümeler oluşur ve jel üzerinde bir tabaka meydana getirirler Zayıf aglutinasyonda ise küçük kümeler oluşur ve reaksiyonun şiddetini değerlendirmek de kolaylaşmış olur

Mikroplate Yöntemi
Mikroplate yönteminde U veya V tabanlı plastik 96 godeli mikrotitrasyon plakları kullanılır Eritrosit süspansiyonu U pleyt için %1-2’lik V pleyt için %003 konsantrasyonda hazırlanır 20 µL antiserum ve 20 µL eritrosit süspansiyonu godeye eklendikten sonra plak santrifüge edilir U pleytler çalkalanıp klasik teknikler gibi değerlendirilirken V tabanlı pleytler 75 C°’de 10 dakika inkübe edildikten sonra değerlendirilir Düşük konsantrasyonda eritrosit kullanıldığı için diğer yöntemlerden daha duyarlıdır Çok az miktarda antiserum kullanıldığı için daha ekonomik bir metotdur

Polybrene Yöntemi
Katyonik bir polimer olan polybrene normal eritrositlerde agregasyona neden olur Bu agregasyon ortama sodyum sitrat eklendiğinde dağılır Eğer eritrositler antikorlarla kaplanmış ise polybrene eklendiğinde antikorlar eritrositler arasında köprü oluşturarak aglutinasyona neden olur Bu şekilde oluşan agregasyon sodyum sitratla dağılmaz Polybrene hem manual hem de otomatik sistemlerde mikroplate veya tüpte kullanılabilir Testte yapılacak ilk işlem eritrosit yüzeyinin antikorlarla kaplanması için eritrosit süspansiyonu ile antiserumu inkübe etmektir Daha sonra ortama polybrene eklenir Agregasyon oluşumu izlenir Santrifügasyon sonrası supernatant uzaklaştırılır ve ortama trisodyum sitrat-dextroz karışımı eklenerek aglutinasyon değerlendirilir